Produk

Uji kromatografi cair kinerja dhuwur anyar kanggo glikosiltransferase adhedhasar derivatisasi karo asam anthranilic lan deteksi fluoresensi.

Tes dikembangake kanthi nggunakake kimia pelabelan unik asam 2-aminobenzoat (2AA; asam anthranilic, AA) kanggo ngukur aktivitas β1-4 galactosyltransferase (GalT-1) lan α2-6 sialyltransferase (ST-6) kanthi cairan kinerja dhuwur. kromatografi (HPLC) kanthi deteksi fluoresensi (Anumula KR. 2006. Kemajuan ing cara derivatisasi fluoresensi kanggo analisis kromatografi cair kinerja dhuwur saka karbohidrat glikoprotein. Biochem Anal 350: 1-23).N-Acetylglucosamine (GlcNAc) lan N-acetyllactosamine digunakake minangka akseptor lan uridine diphosphate (UDP) -galaktosa lan cytidine monophosphate (CMP) -N-acetylneuraminic acid (NANA) minangka donor kanggo GalT-1 lan ST-6.Produk enzim diwenehi label in situ karo AA lan dipisahake saka substrat ing kolom TSKgel Amide 80 nggunakake kondisi fase normal.Unit enzim ditemtokake saka wilayah puncak kanthi mbandhingake karo standar turunan Gal-β1-4GlcNAc lan NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Linearity (wektu lan konsentrasi enzim), presisi (intra- lan interassay) lan reproducibility kanggo assays ditetepake.Tes kasebut ditemokake migunani kanggo ngawasi aktivitas enzim sajrone isolasi lan pemurnian.Tes kasebut sensitif banget lan ditindakake padha utawa luwih apik tinimbang pangukuran adhedhasar gula radioaktif tradisional.Format assay uga bisa digunakake kanggo ngukur aktivitas transferase liyane, yen akseptor karbohidrat ngemot ujung sing nyuda kanggo label.Tes kanggo akseptor glikoprotein dikembangake nggunakake IgG.Cara profiling HPLC cendhak dikembangake kanggo pamisahan glycans IgG (bintennary G0, G1, G2, mono- lan disialylasi), sing nggampangake nemtokake aktivitas GalT-1 lan ST-6 kanthi cepet.Salajengipun, cara profiling iki kudu migunani kanggo ngawasi owah-owahan ing glycans IgG ing setelan klinis.