Produk

Kanggo nemtokake sacara khusus sawetara metabolit 5-fluorouracil (5-FU) lan rong nukleotida monofosfat endogen, kita ngembangake metode asli adhedhasar spektrometri massa kromatografi-tandem cair (LC-MS/MS).Assay iki ngidini kanggo nemtokake: (i) produksi intraselular 5-fluoro-2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (5-FdUMP) saka 5-FU utawa 5-fluoro-2′-deoxyuridine (5-FdUrd) , (ii) pengaruh konsentrasi 5-FdUMP ing rasio 2′-deoxyuridine-5′-monophosphate (dUMP)/thymidine-5′-monophosphate (TMP) intraselular, lan (iii) jembar sekresi 5-FdUMP lan 5-FU saka sel kultur manungsa dening transporter ABC.Ing kahanan eksperimen, sel diinkubasi karo 5-FU utawa 5-FUrd.Banjur, protein sel diencerake dening metanol.Prosedur iki nyedhiyakake pemulihan ekstraksi sing dhuwur.Kajaba iku, kanggo ngukur sekresi 5-FU lan 5-FdUMP saka sel, kita nindakake kuantifikasi molekul kasebut ing medium kultur.Media kasebut langsung disuntikake (5-FU) utawa ing ekstraksi fase padhet nggunakake kartrid ekstraksi Lilin Oasis (5-FdUMP).Pemisahan analit ditindakake ing kolom dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) kanthi mode isocratic nggunakake buffer format ammonium / metanol / banyu (5/5/90, v / v) minangka fase gerak.Wektu mlaku ora ngluwihi 6.2 min.Analit kasebut diionisasi ing antarmuka electrospray ing mode ion negatif.We validasi cara liwat sawetara 2.5-150 ng mL -1 miturut senyawa.Variabilitas intra- lan inter-assay luwih murah tinimbang 10% sajrone pitung dina.Kabeh senyawa stabil ing sel utawa ing medium kultur nalika conto disimpen ing suhu -20 °C paling ora rong minggu, lan sawise telung siklus beku-thaw.Ora ana efek matriks sing diamati ing loro media kasebut.