Produk

Cara gabungan efek saka mutasi simultan kanggo ngganti aktivitas enzim ora gampang diprediksi amarga efek kasebut ora mesthi aditif kanthi cara linear.Mula, karakterisasi efek saka mutasi simultan saka residu asam amino sing ngiket substrat bisa menehi kontribusi sing signifikan kanggo mangerteni spesifik substrat enzim.Ing beta-glikosidase saka Spodoptera frugiperda (Sfbetagly), loro residu Q39 lan E451 berinteraksi karo substrat lan iki penting kanggo nemtokake kekhususan substrat.Mutan ganda saka Sfbetagly (A451E39, S451E39 lan S451N39) disiapake dening mutagenesis sing diarahake situs, ditulis ing bakteri lan diresiki nggunakake kromatografi afinitas.Enzim kasebut ditondoi kanthi nggunakake p-nitrophenyl beta-galactoside lan p-nitrophenyl beta-fucoside minangka substrate.Rasio k cat/Km kanggo mutan tunggal lan ganda saka Sfbetagly sing ngemot mutasi sing diarahake situs ing posisi Q39 lan E451 digunakake kanggo nduduhake yen efek ing energi bebas ESdouble dagger (kompleks negara transisi enzim) saka mutasi ganda (Gdouble). daggerxy) dudu gunggunge efek saka mutasi siji (Gdouble daggerx lan Gdouble daggery).Bedane ing keris Gdouble iki nuduhake yen efek saka mutasi siji sebagian tumpang tindih.Empu, efek umum iki counts mung sapisan ing Gdouble daggerxy.Data kristalografi babagan beta-glikosidase nuduhake anané ikatan hidrogen bidentat sing nglibataké residu Q39 lan E451 lan gugus hidroksil substrat sing padha.Mulane, data termodinamika lan kristalografi nuduhake yen residu Q39 lan E451 duwe pengaruh bebarengan ing interaksi karo substrate.